在現(xiàn)在的科研研究中,最初的研究基本上就是高通量篩選對照組和實驗組的差異表達基因,然后進行大樣本的熒光定量PCR驗證,確定差異基因與某種疾病的相關(guān)性。在之后的研究中,我們就要針對差異基因進行干擾或過表達來進行細胞功能實驗。其中通過流式細胞進行細胞凋亡的檢測是比較重要的方法。
一、服務(wù)介紹
流式細胞術(shù)(FlowCytometry,F(xiàn)CM):
流式細胞術(shù)(FlowCytometry,F(xiàn)CM):
就是對在高速流動的鞘液包裹下的細胞、粒子進行分析和分選的技術(shù),這種細胞或粒子是經(jīng)過特異熒光標(biāo)記的。其特點是測量速度快,每秒鐘能測數(shù)千個乃至上萬個細胞,且可進行多參數(shù)測量,另一特點是在分析的同時可把具有指定特征的細胞分離出來,這就是分選技術(shù)。
重要參數(shù):前向角散射(FSC):前向角散射光的強度與細胞的大小有關(guān),也就是說,同一個細胞群體,F(xiàn)SC強的,其細胞大一些,而FSC弱的,其細胞小一些。側(cè)向角散射(SSC):側(cè)向角散射又稱90°散射或大角散射。側(cè)向角散射光對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感,對胞內(nèi)較大的顆粒也會有反應(yīng)。所以,側(cè)向角散射光的強弱可反應(yīng)細胞內(nèi)精細結(jié)構(gòu)和顆粒的性質(zhì)。熒光信號(FL):是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光,不同的熒光染料其發(fā)射波長不同。通過熒光強度可將同一個細胞群體中的有熒光標(biāo)記的細胞與無熒光標(biāo)記的細胞區(qū)分開來,也就是我們通常所說的陽性細胞,也可以將陽性細胞中的高FL的細胞與低FL的細胞區(qū)分開來,也就是可以把強陽性細胞和弱陽性細胞區(qū)分開來。一般的流式細胞儀只裝有一個激光光源(488nm),可測出三個FL,即FL1、FL2、FL3。FL2-W指檢測熒光的脈沖寬度,區(qū)分單個細胞和雙聯(lián)體細胞FL2-H指脈沖高度,細胞單位面積上的熒光濃度FL2-A指脈沖面積,即細胞熒光總和。
二、服務(wù)流程
1、細胞培養(yǎng)
2、藥物處理
3、試劑處理
4、測定吸光度
5、撰寫實驗報告
三、客戶提供
1、培養(yǎng)好的細胞(大于107)以及所需藥品。
2、藥物作用方式(藥物濃度、時間等)。
四、交付內(nèi)容
實驗報告:詳細操作步驟、統(tǒng)計分析。