單細(xì)胞實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)服務(wù)

單細(xì)胞實(shí)時(shí)定量PCR技服務(wù)
    單細(xì)胞qRT-PCR是在單細(xì)胞水平上對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量分析的技術(shù)。常規(guī)的qRT-PCR所得結(jié)果是數(shù)以百萬(wàn)計(jì)的細(xì)胞的平均水平，只能說(shuō)明基因在一個(gè)細(xì)胞群中大致的表達(dá)情況。由于細(xì)胞的異質(zhì)性，相同組織的單個(gè)細(xì)胞實(shí)際上可能彼此不同，并扮演不同的角色。單細(xì)胞qRT-PCR技術(shù)不僅避免了組織水平分析時(shí)造成的異質(zhì)細(xì)胞干擾,使得基因表達(dá)研究更加精細(xì)、準(zhǔn)確，而且還能夠檢測(cè)導(dǎo)致細(xì)胞分型甚至細(xì)胞間惟一差別的表達(dá)特征，因而獲得了極大關(guān)注。
    單細(xì)胞qRT-PCR技術(shù)為從單核苷酸水平深入研究癌癥發(fā)生、發(fā)展機(jī)制及其診斷、治療提供了新的研究思路并開(kāi)辟了新的研究方向。近年來(lái)，該方法還被廣泛應(yīng)用于組織器官內(nèi)細(xì)胞基因組的異質(zhì)性研究、干細(xì)胞的異質(zhì)性研究、以及臨床指導(dǎo)的病理研究等各個(gè)方面。
 

實(shí)驗(yàn)流程：
    由于單個(gè)細(xì)胞中的mRNA數(shù)量很少,大約只有1 pg左右,因而與常規(guī)的RT-PCR相比,單細(xì)胞RT-PCR在各個(gè)環(huán)節(jié)上都有著顯著差異。常規(guī)RT-PCR首先要將組織中的mRNA或總RNA抽提出來(lái)之后才能進(jìn)行后續(xù)步驟,單細(xì)胞RT-PCR顯然無(wú)法進(jìn)行抽提步驟,因而在獲取單個(gè)細(xì)胞后,在適當(dāng)體積的裂解液中將細(xì)胞裂解,然后直接以裂解產(chǎn)物為模板進(jìn)行RT-PCR。由于沒(méi)有抽提,裂解產(chǎn)物中含有蛋白質(zhì)、RNA以及基因組DNA等各種成分,蛋白質(zhì)因其量極其稀少,可以忽略對(duì)單細(xì)胞RT-PCR的影響,但裂解產(chǎn)物中的基因組DNA相對(duì)于mRNA卻有可能造成極大的干擾。避免這一影響有兩種處理,一是在進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄之前先用DNAaseⅠ消化基因組DNA,另一種方法就是在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)盡量使引物結(jié)合序列跨越相鄰?fù)怙@子的結(jié)合處。

參考文獻(xiàn)：
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